Estudios genéticos para la identificación de la estructura genética de la perdiz roja (alectoris rufa l.)

Como objetivo primordial de este trabajo, se pretende profundizar en el conocimiento del genoma de la especie Alectoris rufa. Estos estudios se concretan en el sexaje a partir del ADN de perdiz en la especie, en el estudio de la dinámica de poblaciones, tanto en silvestres como en cautividad y, por consiguiente, en el conocimiento de la variabilidad genética existente y en la estima de los valores de consanguinidad. Finalmente se pretende la construcción de una genoteca de A. rufa y la posterior búsqueda de marcadores moleculares microsatélites. En la aplicación de la metodología de sexaje se ha introducido una variación respecto a lo publicado por diversos autores, consistente en la necesidad de utilizar enzimas de restricción para la correcta identificación de las bandas que corresponden al sexo femenino, y su diferenciación de los individuos de sexo masculino. En el estudio poblacional se ha puesto de manifiesto la situación genética de dos poblaciones. La primera de ellas, es una población silvestre de Extremadura, y la segunda, una población en cautividad correspondiente a una granja de Cataluña. Se estudian las frecuencias alélicas, las hetercigosidades, el PIC, los estadísticos F de Wright y las distancias genéticas de Nei. Con todos estos estudios se ha comprobado que la situación genética de la población en cautividad presenta más problemas genéticos que la población silvestre, con respecto a la existencia de menor variabilidad genética y de un cierto valor de consanguinidad. Por último, se llevó a cabo la obtención de una genoteca genómica de A. rufa. A partir de ella se puso especial énfasis en la búsqueda de marcadores moleculares microsatélites que ayuden a ampliar los conocimientos que se tienen acerca del genoma de la especie. Se usaron para ello tres vías: una primera, secuenciando al azar colonias con fragmentos de un tamaño adecuado, una segunda; elaborando combinaciones de cebadores con secuencias repetidas en PCR; y, por último, mediante hibridación con sondas fluorescentes de ADN de secuencias microsatélite. Con la primera de las vías se obtuvieron 2 posibles microsatélites, de los que sólo uno resultó tener variabilidad alélica (AG)n. La segunda vía resultó no ser la más adecuada debido a la dificultad de conseguir unas condiciones de PCR optimizadas para cada colonia, obteniéndose de esta manera falsos positivos. Se ha demostrado que la hibridación es la mejor manera de obtener microsatélites a partir de una genoteca. De esta manera se han obtenido dos microsatélites: uno compuesto interrumpido (AT)n (AC)3 T(AC)n (AT)n, y otro sencillo (AC)n.